Eppendorf BioSpectrometer basic - Manuel (Page 102)

Procédés d'évaluation
Eppendorf BioSpectrometer
® basic
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102
12.6 Procédures d'évaluation spéciales pour méthodes Dye
12.6.1 Calcul du facteur pour le colorant du coefficient d'extinction
Pour les méthodes Dye, la concentration du colorant est calculée avec un facteur issu de l'extinction
mesurée (voir
Évaluation avec facteur ou standard à la page 96). Le facteur est saisi pour chaque colorant
dans la fonction General Method Parameter/Dyes. Au lieu de saisir le facteur, il est possible de saisir le
coefficient d'extinction. Dans ce cas, le facteur est calculé de la manière suivante :
F = facteur pour le colorant ; unité : pmol/μL.
ε = coefficient d'extinction pour le colorant ; unité : cm -1 Mol -1 L.
12.6.2 Calcul de la FOI
Dans les méthodes Dye, la fréquence d'incorporation (FOI = Frequency of Incorporation) est calculée et
affichée comme valeur du rapport entre les molécules de colorant et la quantité de nucléotides dans l'acide
nucléique. Le calcul peut être sélectionné pour deux unités de résultats différentes :
Unité MOLÉCULE dye/kb
Unité pmol/μg ADN (ou ARN)
A
YYY
= extinction du colorant.
A
XXX
= extinction de l'acide nucléique.
MM
nt
= masse molaire moyenne du nucléotide : 330 g/mol.
F
NA
= facteur de calcul de l'acide nucléique
ε
Dye
= coefficient d'extinction pour le colorant ; unité : cm -1 M -1
12.6.3 Calcul des quantités de colorant
Le calcul de la quantité (masse) de colorant dans le volume total de l'échantillon est effectué à l'étape
process results/More calculations de la méthode.
M = quantité totale calculée (masse) du colorant dans le récipient de réaction. Unité : pmol.
C = concentration du colorant calculée à partir de la mesure. Unité : pmol/μL.
V
P, gesamt
= volume total de l'échantillon dans le récipient de réaction ; saisi par l'utilisateur dans More
calculations. Unité : μL.
Dye
Dye
F
H
6 10
NA XXX
nt
Dye
YYY
F A
MM A
FOI
u
u
u
6 10
H
NA XXX Dye
YYY
F A
A
FOI
u
u
9 10
H
total P
V C M
,
u