Sonics VCX750 - Manuel (Page 23)

CHAPITRE IV
CONSEILS ET TECHNIQUES D’UTILISATION
DESINTEGRATION DES CELLULES
Les organismes unicellulaires (micro-oranismes) sont constitués d’une paroi cellulaire
externe semi-perméable, solide et rigide entourant la membrane protoplasmique
(cytoplasmique) et le cytoplasme. Le cytoplasme est constitué d’acides nucléiques, de
protéines, de glucides, de lipides, d’enzymes, d’ions inorganiques, de vitamines, de
pigments, d’inclusions et d’environ 80% d’eau. Pour isoler et extraire n’importe quelle de
ces substances de l’intérieur de la cellule, il est nécessaire de briser la paroi cellulaire et
la membrane protoplasmique. Dans certains cas, les cellules peuvent sécréter la substance
désirée, mais dans la plupart des cas la paroi cellulaire doit être désintégrée par ultraons
pour libérer ces substances.
Les micro-organismes sont très différents dans leur sensibilité à la désintégration
ultrasonique. Par exemple, les plus facilement désintégrés sont ceux en forme de
bâtonnet (bacilles), alors que les organismes sphériques (coques) sont beaucoup plus
résistants. Le groupe des mycobactérs, auquel appartient le micro-organisme responsable
de la tuberculose est particulièrement difficile à désintégrer. Généralement, les cellules
animales sont plus facilement désintégrées que les cellules végétales, et les globules
rouges sont plus facilement désintégrés que les cellules musculaires car ces cellules ne
possédent pas de paroi cellulaire.
Avec le traitement par ultrasons, l’agitation moléculaire dans l’échantillon provoque
généralement une élévation de température – surtout avec de petits volumes. Les
températures élevées réduisant la cavitation, la température de l’échantillon doit être
conservée aussi basse que possible – de préférence juste au-dessus de son point de
congélation. Ceci peut être réalisé en immergeant le récipient contenant l’échantillon san
un bain de glace et d’eau salée. L’élévation de température peut également être réduite en
utilisant le pulseur ou en soumettant l’échantillion à plusieurs séries de courtes
sonications.
La désintégration des cellules peut être améliorée en augmentant la pression
hydrostatique habituellement 1 à 4 bar et la viscosité. Pour les micro-organismes,
l’addition de billes de verre d’une taille comprise entre 0.05 et 0.5 mm favorise la
désintégration des cellules en concentrant l’énergie relâchée par la cavitation, et par
écrasement physique. Les billes sont pratiquement indispensables pour la désintégration
de spores ou de levures. Le bon dosage est de un volume de billes pour deux volumes de
liquide.
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