Eppendorf BioSpectrometer basic - Manuel (Page 99)

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Procédés d'évaluation
Eppendorf BioSpectrometer ® basic
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12.5 Procédés d'évaluation spéciaux pour acides nucléiques et protéine UV
Ce chapitre est consacré à l'évaluation des acides nucléiques et/ou protéines contenues dans les groupes
Nucleic acids et Proteins direct UV ainsi que des composants de la biomolécule correspondants du
groupe
Dye labels.
12.5.1 Correction A
260
et correction A
280
Application : correction de l'influence de l'absorbance du colorant sur l'absorbance de l'acide nucléique et/
ou des protéines à 260 et 280
nm, dans les méthodes du groupe Dye labels.
L'application du procédé d'évaluation peut être activée dans les paramètres Correct A260 et Correct A280.
A
XXX, corr
= absorbance corrigée par calcul, à la longueur d'onde de 260 nm ou 280 nm
A
XXX
= absorbance mesurée à la longueur d'onde de 260 nm ou 280 nm
CF = facteur de correction pour la longueur d'onde de 260 nm ou 280 nm (les deux facteurs de correction
utilisées à 260 nm et 280 nm sont spécifiques à un colorant et sont programmés dans General Method
Parameter: Dyes dans la partie Functions).
A
YYY
= absorbance mesurée à la longueur d'onde du colorant.
12.5.2 Rapport A260/A280 et rapport A260/A230
Application : informations sur la pureté de l'acide nucléique mesurée. L'application du procédé
d'évaluation peut être activée dans les paramètres
A260/280 et/ou A260/A230.
"Ratio" désigne le quotient des absorbances mesurées aux longueurs d'onde désignées.
Valeurs indiquées dans la littérature pour les rapports définis avec des acides nucléiques purs :
A260/A280
• ADN : 1,8 à 1,9
• ARN : 1,9 à 2,0
(Current Protocols in Molecular Biology, 1994)
Informations complémentaires sur la pureté des substances mesurées : rapport A260/A230 et rapport
A260/A230 (valeurs du rapport limitées aux acides nucléiques), spectre de longueurs d'onde
d'absorbance.
Pour le rapport A260/A230, on trouve différentes valeurs d'acide nucléique purs dans la littérature :
• ADN : 2,3 à 2,5
(The Nucleic Acids, 1955)
• ADN : 1,9
(Current Protocols in Molecular Biology, 1994)
Les valeurs varient fortement suivant le pH. C'est pourquoi, les acides nucléiques ne devraient pas être
mesurés dans l'eau, mais dans un tampon à un pH compris entre 7 et 7,2 (par ex. tampon TE).
Les valeurs d'absorbance représentées dans les affichages des résultats sont les valeurs
d'absorbance mesurées directement, sans correction.
YYY XXX corr XXX
A CF A A u 
,