Eppendorf AF2200 Plate Reader - Manuel (Page 40)

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Eppendorf
® PlateReader AF2200
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Où U est la tension, Gain l'amplification sélectionnée, 255 l'amplification maximale possible et 1 250 V la
tension d'alimentation maximale du PMT. Exemple : une amplification du signal (= Gain) de 100
correspond à une tension d'alimentation de 490 V :
6.3.3 Réglages du flash
Des mesures rapides avec 1 flash (mesure) par puits sont possibles avec tous les types de plaque ; la
précision de mesure avec une intensité lumineuse faible dépend cependant de la durée de mesure durant
lequel le signal de fluorescence peut être reçu.
Cela n'est pas utile pour augmenter le temps d'intégration standard car le détecteur ne reçoit plus de
signaux une fois que le flash a disparu.
6.3.4 Temps de repos
Avant de mesurer un puits, il est possible de définir un temps de repos. Le mouvement de "va et vient" du
support de plaques peut faire toujours vibrer le ménisque des liquides distribuéspendant que le signal est
intégré. Cela peut faire fluctuer les valeurs mesurées. Cet effet a été observé sur les puits de plaques de 96
puits et sur des puits plus grands.
6.3.5 Filtres recommandés
Afin de permettre un arrière-plan acceptable, le seuil supérieur des longueurs d'onde d'excitation et le
seuil inférieur des longueurs d'onde d'émission doivent être séparés. Ce compromis dépend des propriétés
de filtre. S'il y a beaucoup de molécules fluorescentes, le signal peut être amplifié en élargissant la largeur
de bande de filtre de l'autre bande passante.
6.3.6 Types de microplaques recommandés
D'une manière générale, on recommande pour une sensibilité élevée à la fluorescence d'utiliser des
microplaques noires. Pour la mesure en modeFluorescence, bas, nous recommanons des plaques noires à
fond transparent. N'utilisez pas de volumes inférieurs à un tiers du volume maximal. Si vous utilisez des
volumes plus faibles, vérifiez qu'un type de plaque adéquat est disponible.
Augmentez le nombre de flashs (mesures) par puits jusqu'à ce que le bruit des puits vide ne
s'améliore plus ou que la durée de mesure par puits soit inacceptable.
Si les valeurs maximales d'excitation et d'émission d'un fuorochrome sont proches l'une de
l'autre, elles ne doivent pas être traduites directement en longueurs d'onde centrales pour
filtres à fluorescence.
V = 490V 1250 *
255
100
U =