Hoefer TE70X - Manuel (Page 25)

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5. Notes électrotransfert
• Lancez le transfert dès que possible après
l’électrophorèse des protéines afin de minimiser
la diffusion dans le gel.
• Stacked gels doivent tous être de la même taille.
• Limiter les transferts à deux heures ou moins.
• La concentration en méthanol recommandé
pour différents types de membranes sont:
du type à membrane méthanol %
Nylon chargé 0
Nitrocellulose 10 – 20
PVDF 10 – 20
• Utilisation d’un tampon de faible force ionique
telle que l’un des deux ci-dessous pour empê-
cher la surchauffe. Utilisez le tampon CAPS
quand Tris ne peut pas être utilisé (par exemple,
le peptide de séquençage). CAPS peut améliorer
le transfert en raison de son effet sur la charge
de la protéine (voir Matsudaira, 1987).
Towbin tampon
(25 mM Tris, 192 mM glycine, 20% v/v méthanol,
pH 8,3, 1 litre)
Tris (FW 121,1)
25 mM 3,0 g
Glycine (FW 75,07) 192 mM 14,4 g
SDS* (FW 288,4) 0,1% (3,5 mM) 1,0 g
Dissoudre dans 600 ml d’eau distillée.
Ajouter du méthanol comme requis
† .
Porter à 1 litre avec de l’eau distillée. Ne pas ajuster
le pH, ce qui devrait se situer entre 8.2 à 8.4.
En option: Réfrigérer avant utilisation.
*En option: Ajout SDS peut améliorer l’efficacité du transfert.
†
Selon le type de membrane choisie (voir tableau ci-dessus), addition de
méthanol peut améliorer les résultats de transfert.
Remarque: Les tampons contenant
du méthanol peut se détériorer
si elles sont conservées pendant
de longues périodes ajouter du
méthanol juste avant le transfert.