Hoefer SE245 - Manuel (Page 7)

•
p5
Verser le gel
1
Préparer la quantité requise de solution de monomère.
Désaérer et ajouter l’initiateur et un catalyseur juste
avant la coulée du gel. Utiliser une pipette pour
fournir la solution dans un coin de la plaque, en
prenant soin de ne pas introduire de poches d’air. Voir
ci-dessous pour le niveau de la solution appropriée en
fonction de l’application.
Pas de gel d’empilement
Remplir solution à juste en dessous du haut de la
plaque à encoches. Si des poches d’air former, les
retirer avec une pipette ou une seringue. Mettre en
place un peigne (avec un léger angle) dans chaque
sandwich, en prenant soin de ne pas emprisonner des
bulles d’air sous les dents.
Empilement de gel
Remplir solution à 3 cm en dessous du haut de la
plaque de verre rectangulaire. Cette hauteur permet
1 cm de gel d’empilement ci-dessous les puits. Verser
le gel et appliquer une superposition. Après que le gel
est polymérisé, la préparation du gel d’empilement tel
que décrit ci-dessous.
Électrophorèse 2-D
Remplir solution à environ 1,5 cm en dessous du
haut de la plaque de verre rectangulaire et appliquer
un revêtement. Cette hauteur permet de 4-5 mm
d’espace pour la bande IPG et un joint d’agarose.
2
Superposer chaque gel avec une mince couche d’eau
saturée du n-butanol, de l’eau, ou un tampon de
gel dilué pour minimiser l’exposition de la surface
supérieure de la solution de gel à l’oxygène. Livrer
la solution de superposition lentement à partir d’une
seringue en verre munie d’une aiguille de calibre 22.
Appliquer la solution à proximité de l’entretoise et lui
permettre de s’écouler à travers la surface nu.
3
Permettre au gel pour polymériser pour un minimum
d’une heure.
Attention! L’acrylamide est une
neurotoxine. Toujours porter
des gants et observer toutes
les procédures de sécurité en
laboratoire.