Dako Autostainer - Manuel (Page 10)

Contacter le représentant local Dako avant d’utiliser des réactifs ou des solutions ne
provenant pas de Dako sur l’Autostainer. Certains solvants, acides et autres solutions
peuvent endommager des éléments internes de l’Autostainer et en affecter les
performances ainsi que la garantie.
L’immunohistochimie est un processus de diagnostic en plusieurs étapes nécessitant
une formation spécialisée au choix des réactifs adéquats, à la sélection, à la fixation et
au traitement des tissus, à la préparation de la lame d’IHC et à l’interprétation des
résultats du marquage.
Le marquage des tissus dépend de la manipulation et du traitement corrects des tissus
avant marquage. Une fixation, une congélation, une décongélation, un lavage, un
séchage, un chauffage, une découpe incorrects, ou la contamination par d’autres tissus
ou liquides, sont susceptibles de produire des artéfacts, le piégeage d’anticorps ou des
résultats faussement négatifs. Des résultats incohérents peuvent résulter d’une variation
des méthodes de fixation et d’inclusion ou d’irrégularités inhérentes au tissu. Un contre-
marquage excessif ou incomplet peut donner des résultats incorrects.
L’utilisation de fixateurs périmés ou non tamponnés, ou l’exposition des tissus à une
chaleur excessive (dépassant 60 °C) pendant le traitement peuvent entraîner une
moindre sensibilité au marquage.
L’utilisation de sérums normaux / non immuns de même source animale comme
antisérums secondaires au cours des étapes de blocage peut entraîner l’obtention de
résultats faussement négatifs ou faussement positifs dus à la présence d’auto-anticorps
ou d’anticorps naturels. Des résultats faussement positifs peuvent être obtenus par
fixation non immunologique des réactifs aux coupes tissulaires. Dans certains cas,
l’application d’un autre réactif de blocage avant l’incubation avec l’anticorps primaire
peut être utile pour réduire le fond. Le réactif de blocage recommandé est le réactif Dako
Protein Block Serum-Free (Code X0909).
L’obtention de réactions négatives inattendues pour des néoplasmes faiblement
différenciés peut être la conséquence d’une perte ou d’une diminution sensible de
l’expression de l’antigène ou d’une mutation non-sens du ou des gènes codant pour
l’antigène. L’obtention d’un marquage positif inattendu de tumeurs peut résulter de
l’expression d’un antigène habituellement non exprimé par des cellules normales de
morphologie similaire ou de la persistance ou de l’acquisition d’un antigène par un
néoplasme développant des caractéristiques morphologiques et immunohistochimiques
associées à une autre lignée cellulaire (différenciation divergente). La classification
histopathologique des tumeurs n’est pas une science exacte et certaines références
bibliographiques concernant des cas de marquage inattendu peuvent être
contradictoires.
L’interprétation clinique d’un marquage positif ou d’une absence de marquage doit être
complétée par des études morphologiques et histologiques utilisant des contrôles
adaptés. Les évaluations doivent être effectuées dans le contexte des antécédents
cliniques du patient et des autres examens diagnostiques. Il est de la responsabilité d'un
professionnel certifié connaissant les anticorps, les réactifs et les méthodes utilisées
d’interpréter les lames marquées. Le marquage doit être réalisé dans un laboratoire
certifié détenant une autorisation, sous la supervision d’un professionnel responsable de
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